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土壤木質(zhì)素過氧化物酶(S-LiP)洗滌方法

日期:2021-09-01瀏覽:1104次

土壤木質(zhì)素過氧化物酶(S-LiP)洗滌方法:

1. 自動洗板機:每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,并盡量避免起泡。

1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體,甩干,每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育1小時。

3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,37℃溫育1小時。

5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時,即可終止)。

7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。

9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。

蝮蛇蛇毒蛋白抗體

轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗體

內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪氨酸激酶抗體

酪氨酸蛋白激酶受體B2抗體

磷酸化雌激素受體ER alpha 抗體

重組增強型綠色熒光蛋白抗體

雌激素受體α抗體

雌激素受體α/β抗體

自分泌運動因子抗體

酪氨酸蛋白激酶A3受體抗體

EHM2蛋白抗體

磷酸化真核翻譯起始因子4E抗體

翻譯延伸因子EF-1a抗體

磷酸化雌激素受體α抗體

磷酸化表皮生長因子受體抗體

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體

酪氨酸蛋白激酶受體B4抗體

酪氨酸蛋白激酶A5受體抗體

上皮鈉離子通道蛋白γ/γENaC抗體

癌基因ETS2抗體

內(nèi)皮素3抗體

磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶5抗體


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